1. 如 Buffer GTL 和 Buffer GL 产生沉淀,可在 56℃水浴溶解; 2. 样品应避免反复冻融,否则会导致提取的 DNA 片段小,提取量下降; 3. 所有离心步骤均为台式离心机,室温下操作。
1. 在 1.5ml 离心管中加入 100 μl 溶液 A。 2. 将 3-10 mg 植物叶片直接加到溶液 A 中,用枪头捣碎。如果样品为种子,则将种子敲 碎,然后取一碎片(约 1/4 豌豆大小)进行后续实验步骤。 3. 95℃孵育 10 min,对于比较难裂解的样品,适当延长保温时间至 15-30 min。 4. 加入 100 μl 溶液 B,简短振荡混匀后可直接取上清为模板进行 PCR 扩增。(注:裂解液体积不要超过反应体积的 1/10,建议做梯度稀释测试以确定最佳反应体系。本产品提取 的 DNA 不能用电泳检测方法检测,只能用作扩增模板)
一、液体样品1. 将约 2 μL 液体样品(如全血、细胞培养液、病毒样品、粪便样品)加入到 50 μL 免 提取核酸释放剂中。 (注意:总液体样品用量不要超过本产品用量的 1/10。) 2. 室温放置 3 分钟;对于较难裂解的样品(如有厚壁的真菌等),则保温时间可以延长 到 10-30 分钟。 3. 简短振荡混匀后取样品裂解液直接进行 PCR 扩增或其他扩增。(注:裂解液体积最好不要超过反应体积的 1/10,对 50μL 的扩增体系,加入的裂解液不要超过5μL。由于不同的扩增体系成分不同,建议做梯度测试以确定最佳反应体系)二、组织样品 1. 将或 2 mg 的固体样品(如动物组织、植物叶片、种子等)加入到 50 μL 免提取核酸 释放剂中。(注意:总样品量不要超过 1 mg/10 μL 的比例。) 2. 95℃加热 5 分钟;对于较难裂解的样品(如石蜡组织切片、血斑等),则保温时间可 以延长到 10-30 分钟。 3. 简短振荡混匀后取样品裂解液直接进行 PCR 扩增或其他扩增。(注:裂解液体积最好不要超过反应体积的 1/10,对 50μL 的扩增体系,加入的裂解液不要超过 5μL。由于不同的扩增体系成分不同,建议做梯度测试以确定最佳反应体系)
1. 如 Buffer GL 产生沉淀,可在 56℃水浴溶解; 2. 样品应避免反复冻融,否则会导致提取的 DNA 片段小,提取量下降; 3. 所有离心步骤均为台式离心机,室温下操作。
1. 如 Buffer GTL 和 Buffer GL 产生沉淀,可在 56℃水浴溶解; 2. 样品应避免反复冻融,否则会导致提取的 DNA 片段小,提取量下降; 3. 所有离心步骤均为台式离心机,室温下操作; 4. 按要求在 Buffer W1 和 Buffer W2 中加入无水乙醇。
1. 细菌培养时间一般为 12-16 小时,如接种量大则应减少培养时间,过度培养会降低质 粒质量甚至导致质粒 DNA 突变; 2. 每次使用时都要注意 Buffer S2 和 S3 是否形成沉淀,如有沉淀 37℃溶解后再用; 3. 质粒的产量跟细菌量、质粒拷贝数、质粒大小和操作规范程度密切相关。