1. 切胶:用干净刀片将目的 DNA 条带切下,尽量切除不含 DNA 的凝胶。(注意:紫外线对 DNA 片段有损坏作用,切胶要迅速,避免长时间照射,同时做好眼睛及皮肤的防 护) 2. 称重:将切下的含有目的 DNA 条带的凝胶切成小块,放入 2 ml 塑料离心管中,称 重。(注意:先称一个空的 2 ml 离心管的重量,放入凝胶块后再称一次,两次重量相减得到凝胶的重 量) 3. 溶胶:加入等体积 Buffer GN,60℃水浴,每隔 2-3 min 上下振荡,直到凝胶完全溶解。加入等体积的异丙醇混匀,再加入 10μl 磁珠混匀 5 分钟。(注意:如凝胶重量为 100 mg,其体积可视为 100 μl,则加入 100 μl Buffer GN;如凝胶浓度大于 2%,所用溶胶液体积加倍) 4. 将离心管置于磁力架上静置 1 min,磁珠完全吸附后,吸去液体。 5. 将离心管从磁力架上取下,加 600 μl Buffer W2,旋涡充分混匀 30 s。(注意:Buffer W2 在使用前按要求加入无水乙醇,用后应立即盖紧瓶盖,以防乙醇挥发)6. 将离心管置于磁力架上静置 1 min,磁珠完全吸附后,吸去液体。 7. 将离心管置于磁力架上,开盖室温放置 5-10min。 (注意:乙醇残留会抑制后续的酶反应,所以晾干时要确保乙醇挥发干净。但也不要干燥过度,以 免 DNA 难以洗脱) 8. 将离心管从磁力架上取下,加入 30-50 μl Buffer EB,充分震荡 1-2 min。 9. 将离心管置于磁力架上静置 1 min,磁珠完全吸附后,小心将溶液转移至新的离心管 中,并于适当条件保存。(注意:为增加洗脱效率,可将洗脱液在 60℃预热。如需使用去离子水洗脱,可用 NaOH 调整其 pH 值在 7.0 - 8.5 ...
1. 如 Buffer GTL 和 Buffer GL 产生沉淀,可在 56℃水浴溶解; 2. 样品应避免反复冻融,否则会导致提取的 DNA 片段小,提取量下降; 3. 所有离心步骤均为台式离心机,室温下操作; 4. 按要求在 Buffer W1/W2 中加入无水乙醇。
1. 估计 PCR 反应液或酶切反应液的体积,向其中加入等体积溶液 Buffer GN,充分混 匀(无需去除石蜡油或矿物油)。加入等体积的异丙醇混匀,再加入 10ul 磁珠混匀 5min。(注意:对于回收小于 150bp 的小片段可将溶液 Buffer GN 的体积增加到 3 倍以提高回收率;溶液 混匀后应呈现黄色。如果溶液的颜色为桔红色或紫色,请使用 10 ul 3M 乙酸钠(pH 5.0)将溶液的 颜色调为黄色后再进行后续操作。) 2. 将离心管置于磁力架上静置 1 min,磁珠完全吸附后,吸去液体。 3. 将离心管从磁力架上取下,加 600 ul Buffer W2,旋涡充分混匀 30 s。(注意:Buffer W2 在使用前按要求加入无水乙醇,用后应立即盖紧瓶盖,以防乙醇挥发) 4. 将离心管置于磁力架上静置 1 min,磁珠完全吸附后,吸去液体。 5. 将离心管置于磁力架上,开盖室温放置 5-10min。 (注意:乙醇残留会抑制后续的酶反应,所以晾干时要确保乙醇挥发干净。但也不要干燥过度,以 免 DNA 难以洗脱)6. 将离心管从磁力架上取下,加入 30 ~ 50 ul Buffer EB,充分震荡 1-2 min。7. 将离心管置于磁力架上静置 1 min,磁珠完全吸附后,小心将溶液转移至新的离心管 中,并于适当条件保存。 (注意:为增加洗脱效率,可将洗脱液在 60℃预热。如需使用去离子水洗脱,可用 NaOH 调整其 pH 值在 7.0 - 8.5 之间)
1. 如 Buffer GTL 和 Buffer GL 产生沉淀,可在 56℃水浴溶解; 2. 样品应避免反复冻融,否则会导致提取的 DNA 片段小,提取量下降; 3. 所有离心步骤均为台式离心机,室温下操作; 4. 按要求在 Buffer W1/W2 中加入无水乙醇。
1. 缓冲液 FP1 可能会发黄,并不影响提取效果。若 Buffer QP1 或 Buffer QP2 有沉淀析 出,可在 37℃水浴溶解,摇匀后使用; 2. 所有离心步骤均为使用台式离心机,室温下离心; 3. 样品应避免反复冻融,否则会导致提取的 DNA 片段较小且提取量也下降。
(注意:使用前在 BufferGP1 中加入 β-巯基乙醇,使其终浓度为 0.2%,水浴锅中 65°C 预热) 1. 取植物新鲜组织约 100 mg 或干组织约 30 mg,加入液氮充分研磨。 (注意:如果组织为较幼嫩部分,可不用液氮研磨,直接在研钵中加入 700 μl Buffer GP1 和组织一起研磨即可) 2. 将研磨后的粉末收集到一离心管(自备)中,加入 700 ul 65°C 预热的 Buffer GP1 (使用前在预热的 Buffer GP1 中加入 β-巯基乙醇,使其终浓度为 0.2%),迅速颠倒混匀或用 涡旋振荡器充分振荡混匀,然后将离心管置于 65°C 水浴 20 min,期间每隔 3 ~ 5 min 颠倒离心管混匀样品一次。 (注意:如要去除 RNA,可在上述步骤完成后加入浓度为 100mg/ml 的 RNaseA 4 μl,振荡混匀,室 温处理 5~10min) 3. 加入 700 μl 氯仿,充分混匀,12,000 rpm 离心 5 min。 (注意:如果提取的植物材料富含多酚或淀粉,可在第 3 步骤前用酚:氯仿/1:1 进行等体积抽提)4. 小心将上层水相转入一新的离心管(自备)中,加入 700 μl Buffer GP2,充分混匀。 将混匀后的溶液转入离心吸附柱中,若一次不能转移完成,可分次加入,12,000 rpm 离心 30 sec,弃收集管中废液。 5. 向吸附柱内加入 500 μl 的 Buffer W1,室温 12,000 rpm 离心 30 sec,弃收集管中废 液。 (注意:Buffer W1 是浓缩液,按要求加入乙醇,用后及时盖紧,以防乙醇挥发) 6. 向吸附柱内加入 500 μl 的 Buffer ...