（注意：以下举例为常规PCR体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小 不同进行相应的调整和优化） 1. PCR体系 推荐反应体系（20 μl）试剂用量模板DNAPrimer 1 (10 μM)0.5 μlPrimer 2 (10 μM)0.5 μl2×Taq PCR MasterMix（无甘油）10 μlddH2OUp to 20 μl（注意：引物浓度请以终浓度 0.1 - 1.0 uM 作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下，可提高引物的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系）2. PCR 程序过程温度时间预变性94℃2 min25 ~ 35 cycles变性94℃30 sec退火55-65℃30 sec延伸72℃1kb/30 sec终延伸72℃2 min（注意：a 一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度 Tm 低 5℃，无法得到理想的扩增效率时，适 当降低退火温度；发生非特异性反应时，提高退火温度，由此优化反应条件。b 延伸时间应根据所扩 增片段大小设定，Taq DNA Polymerase 的扩增效率为 1 kb/30 sec。c 可根据扩增产物的下游应用设定 循环数。如果循环次数太少，扩增量不足；如果循环次数太多，错配机率会增加，非特异性背景严重。 所以，在保证产物得率的前提下，应尽量减少循环次数）3. 结果检测：反应结束后取5 μl反应产物，加入适量上样缓冲液，然后进行琼脂糖凝 胶电泳检测。