一、液体样品1. 将约 2 μL 液体样品（如全血、细胞培养液、病毒样品、粪便样品）加入到 50 μL 免 提取核酸释放剂中。 （注意：总液体样品用量不要超过本产品用量的 1/10。） 2. 室温放置 3 分钟；对于较难裂解的样品（如有厚壁的真菌等），则保温时间可以延长 到 10-30 分钟。 3. 简短振荡混匀后取样品裂解液直接进行 PCR 扩增或其他扩增。（注：裂解液体积最好不要超过反应体积的 1/10，对 50μL 的扩增体系，加入的裂解液不要超过5μL。由于不同的扩增体系成分不同，建议做梯度测试以确定最佳反应体系）二、组织样品 1. 将或 2 mg 的固体样品（如动物组织、植物叶片、种子等）加入到 50 μL 免提取核酸 释放剂中。（注意：总样品量不要超过 1 mg/10 μL 的比例。） 2. 95℃加热 5 分钟；对于较难裂解的样品（如石蜡组织切片、血斑等），则保温时间可 以延长到 10-30 分钟。 3. 简短振荡混匀后取样品裂解液直接进行 PCR 扩增或其他扩增。（注：裂解液体积最好不要超过反应体积的 1/10，对 50μL 的扩增体系，加入的裂解液不要超过 5μL。由于不同的扩增体系成分不同，建议做梯度测试以确定最佳反应体系）
1. 如 Buffer GL 产生沉淀，可在 56℃水浴溶解； 2. 样品应避免反复冻融，否则会导致提取的 DNA 片段小，提取量下降； 3. 所有离心步骤均为台式离心机，室温下操作。
1. 如 Buffer GTL 和 Buffer GL 产生沉淀，可在 56℃水浴溶解； 2. 样品应避免反复冻融，否则会导致提取的 DNA 片段小，提取量下降； 3. 所有离心步骤均为台式离心机，室温下操作； 4. 按要求在 Buffer W1 和 Buffer W2 中加入无水乙醇。
（注意：以下举例为推荐PCR体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的调整和优化）1. PCR体系推荐反应体系（20 μl）试剂用量模板DNAPrimer mix (10 μM each)0.5 μl10 × Multiplex Buffer2 μlMultiplex DNA Polymerase1 μldNTP（10mM）0.5 μlddH2OUp to 20 μl（注意：推荐引物反应终浓度为每条引物0.1 μM，可在0.05 - 0.4 μM之间调整。）2. PCR程序过程温度时间预变性95℃5 min25 ~ 35 cycles变性95℃30 sec退火55 ~ 65℃30 sec延伸72℃60 sec/kb最后延伸72℃5 min（注意：a. 多数情况下，使用默认退火温度即可。如扩增效果不佳，可通过设置退火温度梯度实验来摸索最适退火温度。b. 预变性时间为5 min，用于充分释放酶活。请勿降低温度或缩短时间。c. 对于低拷贝模板、长片段或者扩增片段较多的情况，可延长退火时间至3 min以提高扩增效率。d. 延伸时间以最长片段为准设定。适度延长延伸时间有助于提高扩增产量且有利于困难模板扩增。延伸时间过长可能会导致非特异性扩增增多。e. 扩增微量样本时，可通过增加循环数提高扩增产物量。循环数过多可能会导致非特异性扩增增多。）
（注意：以下举例为常规qPCR 反应体系和反应程序，实际操作中应根据模板、引物结构和目的 片段大小不同进行相应的改进和优化）1. 根据以下表格配置反应体系，总体积为20 μl试剂用量终浓度2 × Probe qPCR Master Mix10 μl1 ×正义引物 (10 μM)0.5 μl0.25 μM反义引物 (10 μM)0.5 μl0.25 μM探针(10 μM)0.5 μl0.25 μM50× ROX Reference Dye I or II0.4 μl1 ×模板DNAx μlDEPC-ddH2OUp to 20 μl注意：1）通常引物浓度以 0.25 μM 可以得到较好结果，可以在 0.1 ~ 1.0 μM 作为设定范围的参考。 2）使用的探针浓度，与使用的荧光定量 PCR 仪、探针种类、荧光标记物质种类有关，实际使用时 请参照仪器说明书，或各荧光探针的具体使用要求进行浓度的调节。 3）通常 DNA 模板的量以 10-100 ng 基因组 DNA 或 1-10 ng cDNA 为参照，因不同物种的模板中含 有的目的基因拷贝数不同，可对模板进行梯度稀释，以确定最佳的模板使用量。需使用 ROX Reference Dye I 的机型：ABI Prism5700、7000、7300、7700、7900、7900HT、 7900HT Fast、Step-One、Step-One Plus。 需使用 ROX Reference Dye II 的机型：ABI Prism 7500/7500Fast、ViiA7, Stratagene MX4000/MX3005P/MX3000P。 不需要使用 ROX 的机型：Bio-Rad CFX96, CFX384, ...
（注意：以下举例为常规PCR体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小 不同进行相应的调整和优化） 1. PCR体系 推荐反应体系（20 μl）试剂用量模板DNAPrimer 1 (10 μM)0.5 μlPrimer 2 (10 μM)0.5 μl2×Taq PCR MasterMix（无甘油）10 μlddH2OUp to 20 μl（注意：引物浓度请以终浓度 0.1 - 1.0 uM 作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下，可提高引物的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系）2. PCR 程序过程温度时间预变性94℃2 min25 ~ 35 cycles变性94℃30 sec退火55-65℃30 sec延伸72℃1kb/30 sec终延伸72℃2 min（注意：a 一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度 Tm 低 5℃，无法得到理想的扩增效率时，适 当降低退火温度；发生非特异性反应时，提高退火温度，由此优化反应条件。b 延伸时间应根据所扩 增片段大小设定，Taq DNA Polymerase 的扩增效率为 1 kb/30 sec。c 可根据扩增产物的下游应用设定 循环数。如果循环次数太少，扩增量不足；如果循环次数太多，错配机率会增加，非特异性背景严重。 所以，在保证产物得率的前提下，应尽量减少循环次数）3. 结果检测：反应结束后取5 μl反应产物，加入适量上样缓冲液，然后进行琼脂糖凝 胶电泳检测。