1. 估计 PCR 反应液或酶切反应液的体积,向其中加入等体积溶液 Buffer GN,充分混 匀(无需去除石蜡油或矿物油)。加入等体积的异丙醇混匀,再加入 10ul 磁珠混匀 5min。
(注意:对于回收小于 150bp 的小片段可将溶液 Buffer GN 的体积增加到 3 倍以提高回收率;溶液 混匀后应呈现黄色。如果溶液的颜色为桔红色或紫色,请使用 10 ul 3M 乙酸钠(pH 5.0)将溶液的 颜色调为黄色后再进行后续操作。)
2. 将离心管置于磁力架上静置 1 min,磁珠完全吸附后,吸去液体。 3. 将离心管从磁力架上取下,加 600 ul Buffer W2,旋涡充分混匀 30 s。
(注意:Buffer W2 在使用前按要求加入无水乙醇,用后应立即盖紧瓶盖,以防乙醇挥发)
4. 将离心管置于磁力架上静置 1 min,磁珠完全吸附后,吸去液体。
5. 将离心管置于磁力架上,开盖室温放置 5-10min。
(注意:乙醇残留会抑制后续的酶反应,所以晾干时要确保乙醇挥发干净。但也不要干燥过度,以 免 DNA 难以洗脱)
6. 将离心管从磁力架上取下,加入 30 ~ 50 ul Buffer EB,充分震荡 1-2 min。
7. 将离心管置于磁力架上静置 1 min,磁珠完全吸附后,小心将溶液转移至新的离心管 中,并于适当条件保存。
(注意:为增加洗脱效率,可将洗脱液在 60℃预热。如需使用去离子水洗脱,可用 NaOH 调整其 pH 值在 7.0 - 8.5 之间)