1. 切胶:用干净刀片将目的 DNA 条带切下,尽量切除不含 DNA 的凝胶。
(注意:紫外线对 DNA 片段有损坏作用,切胶要迅速,避免长时间照射,同时做好眼睛及皮肤的防 护)
2. 称重:将切下的含有目的 DNA 条带的凝胶切成小块,放入 2 ml 塑料离心管中,称 重。
(注意:先称一个空的 2 ml 离心管的重量,放入凝胶块后再称一次,两次重量相减得到凝胶的重 量)
3. 溶胶:加入等体积 Buffer GN,60℃水浴,每隔 2-3 min 上下振荡,直到凝胶完全溶解。加入等体积的异丙醇混匀,再加入 10μl 磁珠混匀 5 分钟。
(注意:如凝胶重量为 100 mg,其体积可视为 100 μl,则加入 100 μl Buffer GN;如凝胶浓度大于 2%,所用溶胶液体积加倍)
4. 将离心管置于磁力架上静置 1 min,磁珠完全吸附后,吸去液体。 5. 将离心管从磁力架上取下,加 600 μl Buffer W2,旋涡充分混匀 30 s。
(注意:Buffer W2 在使用前按要求加入无水乙醇,用后应立即盖紧瓶盖,以防乙醇挥发)
6. 将离心管置于磁力架上静置 1 min,磁珠完全吸附后,吸去液体。
7. 将离心管置于磁力架上,开盖室温放置 5-10min。
(注意:乙醇残留会抑制后续的酶反应,所以晾干时要确保乙醇挥发干净。但也不要干燥过度,以 免 DNA 难以洗脱)
8. 将离心管从磁力架上取下,加入 30-50 μl Buffer EB,充分震荡 1-2 min。
9. 将离心管置于磁力架上静置 1 min,磁珠完全吸附后,小心将溶液转移至新的离心管 中,并于适当条件保存。
(注意:为增加洗脱效率,可将洗脱液在 60℃预热。如需使用去离子水洗脱,可用 NaOH 调整其 pH 值在 7.0 - 8.5 之间)