1. 易错PCR体系
推荐反应体系（30 μl）
试剂 | 用量 |
模板DNA | 10-100 ng |
Primer F (10 μM) | 1 μl |
Primer R (10 μM) | 1 μl |
2× Error Prone PCR Mix | 15 μl |
10× MnCl2 | 3 μl |
ddH2O | Up to 30 μl |
2. 易错PCR程
序 按用户已经优化的PCR条件进行一定循环数的PCR，如果没有优化的PCR条件，可 先尝试下面的PCR程序。
过程 | 温度 | 时间 |
预变性 | 94℃ | 3 min |
30-60 cycles | 变性 | 94℃ | 30 sec |
退火 | 45℃ | 30 sec |
延伸 | 72℃ | 1 min/kb |
3. 结果检测：反应结束后取5 μl反应产物，加入适量上样缓冲液，然后进行琼脂糖凝 胶电泳，检测是否得到预期片段大小的PCR产物。
4. 胶回收易错PCR扩增产物、克隆并对单菌落进行功能筛选或测序分析、如果需要增 加突变率，可以突变后的DNA为模板，进行连续易错PCR。