（注意：总反应体积为20 μl，总RNA的量为10 ng - 5 μg，若起始RNA的量小于50 ng，则建议加 入RNA酶抑制剂RNasin）
1. 将 5 × RT Buffer 和 M-MLV 反转录酶溶解并置于冰上备用，准备好 RNA 模板、引物 （oligo dT，随机引物，或者二者的 Primer Mix、或者特异性引物），dNTP Mix、DEPCddH2O 等。
2. 在无 RNase 的 PCR 管中加入引物，总 RNA (10 ng ~ 5 μg)或 mRNA(1 ~ 500 ng)，4 μl dNTP (2.5 mM each)，4 μl 5 × RT Buffer，1 μl M-MLV 反转录酶，补足 DEPC-ddH2O 至 20 μl。
3. 振荡混匀，离心数秒使反应液聚集于 PCR 管底部。
4. 42℃保温 15-60 min。85℃孵育 5min，反应结束后，短暂离心，置于冰上冷却。
5. 该产物可直接用于第二链的合成或 RT- PCR 扩增反应，保存请置于-20℃。