（注意：以下举例为常规PCR体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小 不同进行相应的调整和优化）
1. PCR体系
推荐反应体系（20 μl）
试剂 | 用量 |
模板 DNA | < 1μg |
Primer 1 (10 μM) | 0.5 μl |
Primer 2 (10 μM) | 0.5 μl |
2×Pfu PCR MasterMix | 10 μl |
ddH2O | Up to 20 μl |
（注意：引物浓度请以终浓度 0.1 - 1.0 μM 作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下，可提高引 物的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系）
2. PCR 程序
过程 |
| 温度 | 时间 |
预变性 | 94℃ | 2 min |
| 变性 | 94℃ | 30 sec |
25 ~ 35 cycles | 退火 | 55 ~ 65℃ | 30 sec |
| 延伸 | 72℃ | 60 sec/kb |
最后延伸 | 72℃ | 5 min |
（注意：a 一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度 Tm 低 5℃，无法得到理想的扩增效率 时，适当降低退火温度；发生非特异性反应时，提高退火温度，由此优化反应条件。b 延伸时间应 根据所扩增片段大小设定，Pfu DNA Polymerase 的扩增效率为1 kb/min。c 可根据扩增产物的下游 应用设定循环数。如果循环次数太少，扩增量不足；如果循环次数太多，错配机率会增加，非特异 性背景严重。所以，在保证产物得率的前提下，应尽量减少循环次数）
3. 结果检测：反应结束后取5 μl反应产物，加入适量上样缓冲液（含染料的不用加）， 然后进行琼脂糖凝胶电泳检测。