一、DNA 提取(样本制备区)
用自选方法提取纯化样品 DNA,本试剂盒跟市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。 建议使用高效植物基因组 DNA 提取试剂盒(Cat: GZ011102-50)提取 DNA。
二、试剂配制(试剂准备区)
若有 N 个待检样品,准备 N+2 个 PCR 管(N 个待检样品+1 个阴性对照+1 个阳性对 照),向各 PCR 管中分别加入下列成分。
成分 | N个 待检样品管 | PCR 阴性对照 | PCR 阳性对照 |
2×Taq PCR Master Mix | 各10 μL | 10 μL | 10 μL |
转基因品系玉米MON863 PCR引物混合液 | 各1 μL | 1 μL | 1 μL |
ddH2O | 7 μL | 7 μL | 7 μL |
转移至样本准备区。
三、添加模板(模板添加区)
向PCR管中分别加入2ul模板,顺序为阴性对照(ddH2O)、待测样品模板、转基因品系玉米MON863 PCR阳性对照,离心30秒,立即进行扩增反应。
四、扩增反应(扩增及产物分析区)
将PCR管放置在PCR扩增仪器样品槽相应位置,进行扩增,扩增程序如下:
过程 | 温度 | 时间 |
预变性 | 95℃ | 3 min |
PCR反应 (35个循环) | 95℃ | 20 sec |
58℃ | 20 sec |
72℃ | 15 sec |
最后延伸 | 72℃ | 5 min |
五、电泳检测
取 5-10 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 2×Taq PCR Master Mix 含 染料,在扩增结束后可以直接上样,不需要另外再加 loading buffer。 阳性对照结果:有 411bp 条带。 阴性对照结果:无 411bp 条带。 样本检测结果:有 411bp 条带,表明该样本是转基因品系玉米 MON863,结果为阳 性;无 411bp 条带,该样本不是转基因品系玉米 MON863,结果为阴性。