DNA 转染优化方案
为达到高转染效率和低细胞毒性的最佳效果,可以对 DNA 和转染试剂的比例及转染 初始细胞密度进行优化。比如要确保细胞在转染时汇合度大于 90%,DNA (μg): PolyproFect 试剂 (μl) 的比值在 1:1 到 1:4 范围内。
扩大或减小转染规模
在不同培养容器中,转染时培养基、DNA/RNA 和 PolyproFect 用量,请参考下表。 对于自动化,高通量转染,建议在 96 孔板中加入 50µl 复合物。注意:如果想将细胞直接 加入到转染复合物中来进行快速 96 孔板转染。在板中制备复合物,直接加入两倍于通用 实验方案所建议的细胞数量,总体积仍为 100ul。在复合物存在的情况下,细胞仍可贴壁。
培养容器 | 培养表面积 (cm2) | 培养基体积 | 稀释培养基体积 | DNA 转染 |
DNA | PolyproFect 试剂 |
96孔板 | 0.3 | 100 µl | 2 × 25 µl | 0.2 µg | 0.5 µl |
24孔板 | 2 | 500 µl | 2 × 50 µl | 0.8 µg | 2.0 µl |
12孔板 | 4 | 1 ml | 2 × 100 µl | 1.6 µg | 4.0 µl |
6孔板 | 10 | 2 ml | 2 × 250 µl | 4.0 µg | 10 µl |
6cm培养皿 | 20 | 5 ml | 2 × 500 µl | 8.0 µg | 20 µl |
10cm培养皿 | 60 | 10 ml | 2 × 1.5 ml | 24 µg | 60 µl |