1、 细菌培养时间一般为 12 ~ 16 小时,如接种量大则应减少培养时间,过度培养会降低 质粒质量甚至导致质粒 DNA 突变; 2、每次使用时都要注意 Buffer S2 和 S5 是否形成沉淀,如有沉淀 37℃溶解后再用; 3、质粒的产量跟细菌量、质粒拷贝数、质粒大小和操作规范程度密切相关。
1、 Buffer BL 的加入能够改善吸附柱的吸附能力并提高吸附柱的均一性和稳定性,消除高 温潮湿或其他不良环境因素对吸附柱造成的影响。 2、 使用前请先检查 Buffer BL、Buffer PB 是否出现浑浊,如有混浊现象,可在 37℃水浴 中加热几分钟,即可恢复澄清。 3、溶液 Buffer PB 含有 pH 指示剂,黄色,pH≤7.5。 4、 回收率与初始 DNA 量和洗脱体积有关,初始量越少、洗脱体积越小,回收率越低。
1. 如 Buffer GL,Buffer W1 产生沉淀,可在 56℃水浴溶解; 2. 样品应避免反复冻融,否则会导致提取的 DNA 片段小,提取量下降; 3. 所有离心步骤均为台式离心机,室温下操作;
1. 样品避免反复冻融,否则会使蛋白变性或产生沉淀,导致提取的 DNA 片段小,提取量 下降。2. 如 Buffer GB、Buffer RW1 结晶或产生沉淀,可在 56℃水浴溶解。3. 所有离心步骤均为室温下操作。
1、如溶液产生沉淀,使用前应先将试剂盒内的溶液在室温中放置一段时间,必要时可在 37℃水浴溶解,用后及时将瓶盖盖紧; 2、所有操作都应在室温进行,操作过程中应注意防护,不要将溶液溅到皮肤上,眼睛 里; 3、如下一步实验要求较高,则应尽量使用 TAE 电泳缓冲液,电泳时最好使用新的电泳缓 冲液,以免影响电泳和回收效果; 4、切胶时,紫外照射时间应尽量短,以免对 DNA 造成损伤; 5、 如果回收率较低,可在胶充分溶解后检测 pH 值,如 pH 值大于 7.5,可向含有 DNA 的胶溶液中加 10 ~ 30 µl 3 M 醋酸钠(pH5.0)将 pH 值调到 5 ~ 7 之间。 6、回收10 kb 的 DNA 片段时,应加大溶胶液的体积,延长吸附和洗脱的时 间。 7、回收率与初始 DNA 量和洗脱体积有关,初始量越少、洗脱体积越少,回收率越低。
1. 拿到样品后要尽快在 4 ~ 10%的福尔马林中固定,固定时间以 8 ~ 24 h 内为宜,时间过 长导致基因组断裂,影响下游实验; 2. 确保包埋前的样品彻底脱水,残留的福尔马林会抑制 PCR 检测酶的作用; 3. 本产品适用于医学、科学实验研究; 4. 本产品所提 DNA 的完整性依赖于样本类型、储存时间以及固定条件,如果甲醛固定时 间过长或样本存放时间过久(>1 年)则易导致 DNA 完整性受损,无法扩出长片段; 5. 若 Buffer GA、GL、W1 中有沉淀,可在 37℃水浴中溶解,摇匀后使用。